د ویروس نیوکلیک اسید کشف

د ډیری ویروسونو جینومیک ترتیبونه پیژندل شوي.د نیوکلیک اسید تحقیقات چې د DNA لنډې برخې دي د بشپړونکي ویروس DNA یا RNA برخو سره د هایبرډیز کولو لپاره ډیزاین شوي.د پولیمیریز چین عکس العمل (PCR) د ویروس کشف کولو لپاره خورا مؤثر تخنیک دی.په دې وروستیو کې د لوړې کچې تشخیصي میتودونه رامینځته شوي.

الف. د نیوکلیک اسید د هایبرډیزیشن تخنیک

د نیوکلیک اسید هایبرډیزیشن، په عمده توګه د سویلي بلاټینګ (سوترن) او شمالي بلاټینګ (شمالي) په شمول، د ویروس د تشخیص په ساحه کې یو چټک پرمختللی نوی تخنیک دی.د هایبرډیزیشن ارزونې دلیل د DNA لنډې برخې کارول دي (د "تحقیق" په نوم یادیږي) د بشپړونکي ویروس DNA یا RNA برخو سره هایبرډیز کولو لپاره ډیزاین شوي.د تودوخې یا الکلین درملنې په واسطه، دوه اړخیزه نښه شوي DNA یا RNA په واحد سټنډونو کې جلا کیږي او بیا په کلک ملاتړ کې متحرک کیږي.له هغې وروسته، تحقیقات اضافه کیږي او د هدف DNA یا RNA سره هایبرډیز کیږي.لکه څنګه چې پروب د آیسوټوپ یا غیر راډیو اکټیو نیوکلایډ سره لیبل شوی ، هدف DNA یا RNA د آټوراډیوګرافي یا د بایوټین - ایوډین سیسټم لخوا کشف کیدی شي.څرنګه چې ډیری ویروس جینومونه کلون شوي او ترتیب شوي، دوی په نمونه کې د تحقیقاتو په توګه د ویروس - ځانګړي ترتیبونو په کارولو سره کشف کیدی شي.اوس مهال، د هایبرډیزیشن میتودونه عبارت دي له: ډاټ بلاټ، په حجرو کې د سیټو هایبرډیزیشن، د DNA بلاټینګ (DNA) (سوترن بلاټ) او RNA بلاټینګ (RNA) (شمالي بلاټ).

د B.PCR ټیکنالوژي

په وروستیو کلونو کې، د ویټرو نیوکلیک اسید امپلیفیکیشن تخنیکونو لړۍ د PCR پراساس رامینځته شوې ترڅو غیر حساس یا غیر کرل شوي ویروسونه معاینه کړي.PCR یو میتود دی چې کولی شي د ویټرو پولیمیریز عکس العمل په واسطه ځانګړي DNA ترتیب ترکیب کړي.د PCR په پروسه کې د حرارتي دورې درې مرحلې شاملې دي: ډینیټوریشن، اینیلینګ، او غزول په لوړه تودوخه (93℃~95℃) کې، دوه اړخیزه DNA په دوه واحد DNA کې جلا کیږي؛بیا په ټیټه تودوخه کې (37 ℃ ~ 60 ℃)، دوه ترکیب شوي نیوکلیوټایډ پریمر د بشپړونکي DNA برخو ته انیل کوي؛پداسې حال کې چې د Taq انزایم (72℃) لپاره په مناسبه تودوخه کې، د نوي DNA زنځیرونو ترکیب د پرائمر 3' پای څخه پیل کیږي د بشپړونکي DNA د ټیمپلیټ په توګه او واحد نیوکلیوټایډونه د موادو په توګه کاروي.نو د هر دورې وروسته، د DNA یو سلسله په دوو زنځیرونو کې پراخ کیدی شي.د دې پروسې په تکرار سره، هر د DNA سلسله چې په یوه دوره کې ترکیب شوي په راتلونکي دور کې د ټیمپلیټ په توګه کارول کیدی شي، او د DNA زنځیرونو شمیر په هر دور کې دوه چنده کیږي، پدې معنی چې د PCR تولید د 2n لاګ سرعت کې پراخ شوی.د 25 څخه تر 30 دورې وروسته، د PCR تولید د الیکٹروفورسس له لارې پیژندل کیږي، او د DNA ځانګړي محصولات د UV رڼا (254nm) الندې لیدل کیدی شي.د ځانګړتیا، حساسیت او اسانتیا د ګټې لپاره، PCR د ډیری ویروس انتاناتو لکه HCV، HIV، CMV، او HPV په کلینیکي تشخیص کې تصویب شوی.څرنګه چې PCR خورا حساس دی، دا کولی شي د Fg په کچه د ویروس DNA کشف کړي، عملیات باید په ډیر احتیاط سره ترسره شي ترڅو د غلط مثبت څخه مخنیوی وشي.برسېره پردې، د نیوکلیک اسید ازموینې مثبته پایله پدې معنی نه ده چې په نمونه کې ژوندی ساري ویروس شتون لري.

د PCR تخنیک په پراخه توګه پلي کولو سره، نوي تخنیکونه او میتودونه د مختلف ازموینې موخو لپاره د PCR تخنیک پراساس رامینځته شوي.د مثال په توګه، د ریښتیني وخت کمیتي PCR کولی شي د ویروس بار کشف کړي؛په حالت کې PCR په نسج یا حجرو کې د ویروس انتان پیژندلو لپاره کارول کیږي.ځړول شوي PCR کولی شي د PCR ځانګړتیا زیاته کړي.د دوی په منځ کې، د حقیقي وخت کمیتي PCR په چټکۍ سره رامینځته شوی.ډیری نوي تخنیکونه، لکه د TaqMan hydrolysis probe، hybridization probe، او molecular beakon probe، د ریښتیني وخت کمیتي PCR تخنیک سره یوځای شوي، چې په پراخه توګه په کلینیکي څیړنو کې کارول کیږي.د ناروغانو د بدن په مایعاتو کې د ویروس بار په سمه توګه پیژندلو سربیره، دا طریقه د مخدره توکو د زغملو متغیر کشف کولو لپاره هم کارول کیدی شي.له همدې امله، د حقیقي وخت کمیتي PCR په عمده توګه د معالجې اغیزې ارزونې او د مخدره توکو د زغم څارنه کې کارول کیږي.

ج. د ویروس نیوکلیک اسیدونو د لوړې کچې کشف

د نویو انتاني ناروغیو ګړندۍ تشخیص اړتیاو پوره کولو لپاره ، د ډی این اے چپس (DNA) په څیر د لوړې کچې کشف کولو بیلابیل میتودونه رامینځته شوي.د DNA چپسونو لپاره، ځانګړي پروبونه ترکیب شوي او په خورا لوړ کثافت کې د کوچني سیلیکون چپسونو سره وصل شوي ترڅو د DNA تحقیقاتي مایکروری (DNA) رامینځته کړي کوم چې د نمونې سره هایبرډیز کیدی شي.د هایبرډیزیشن سیګنال د کنفوکال مایکروسکوپ یا لیزر سکینر لخوا عکس اخیستل کیدی شي او د کمپیوټر لخوا پروسس کیدی شي او د مختلف جینونو په اړه لوی معلومات ترلاسه کیدی شي.د DNA چپ دوه ډوله دي.د "ترکیب چپ" په لاندې ډول دی: ځانګړي oligonucleotides په مستقیم ډول په چپس کې ترکیب شوي.بل د DNA پول چپ دی.کلون شوي جینونه یا د PCR محصولات په ترتیب سره په سلایډ کې چاپ شوي.د DNA چپ ټیکنالوژۍ ګټه دا ده چې په ورته وخت کې د DNA ترتیبونو لوی مقدار کشف کول.د ناروغۍ کشف کولو چپ وروستۍ نسخه کولی شي په یوځل کې له 1700 څخه ډیر انسان ویروسونه وپیژني.د DNA چپ ټیکنالوژۍ د دودیز نیوکلیک اسید هایبرډیزیشن میتودونو ستونزې حل کړې او د ویروس تشخیص او ایپیډیمولوژیکي مطالعې کې خورا پراخه غوښتنلیکونه لري.